%53تخفیف

بررسی بیان ژن BIF-1 در سرطان سینه و ارتباط آن با خصوصیات هیستوپاتولوژیکی(وضعیت grade وStage) و گیرنده¬های هورمونی(PR ,ER ,HER2) تومور

تعداد   116    صفحه در فایل   word

چکیده :

زمینه: سرطان سینه یک بیماری هتروژن بوده و بیماران واجد یک روند بیماری و درمان ممکن است نتایج بالینی متفاوتی را بروز  دهند. پروتئین BIF-1 یکی از اعضای خانواده endophilin B  بوده که پروتئین  pro-apoptotic BAX را در پاسخ به سیگنال­های آپوپتوزی ایجاد می­کند. فقدان BIF-1 مسیر داخلی آپوپتوز  را مهار کرده و موجب تشدید تومورزایی می­شود. هدف از مطالعه حاضر سنجش بیان ژن BIF-1 و بررسی اهمیت پروگنوستیک آن در سرطان سینه می­باشد.

روش کار: بیان ژن BIF-1 در 50 تومور سرطان سینه و 50 بافت نرمال پستانی با استفاده از تکنیک SYBR Green Real-Time PCR مورد بررسی قرار گرفت. جهت مقایسه میزان بیان ژن BIF-1 در بافت سرطانی و  نرمال از روش آماری Mann whitny و برای بررسی ارتباط اهمیت پروگنوستیک آن از آنالیزهای چند متغیر و تک متغیر با استفاده از نرم افزار SPSS استفاده شد.

یافته ها: نتایج این تحقیق نمایانگر این بود که بیان نسبی ژن BIF-1 در بافت­های سرطانی پستانی در مقایسه با بافت های نرمال پستانی بطور معنی داری کمتر است. از سوی دیگر از نظر آماری بیان کم ژن BIF-1 با رخداد بالاتر متاستاز به غدد لنفاوی و Stage بالینی بالاتر، معنی دار نبود.

 

نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان داد که بیان ژن BIF-1 می‌تواند به عنوان یک بیومارکر موثر در سرطان سینه معرفی شود.

فهرست مطالب

 

عنوان                                                                                                                                       صفحه

فصل اول: مقدمه. 1

1-1-پیش درآمد. 2

1-2-تاریخچه سرطان. 4

1-2-1-سرطان. 5

1-2-2-طبقه­بندی سرطان. 8

1-2-3-ژنتیک سرطان. 9

1-2-4-ماهیت ژن­های سرطانی.. 10

1-3-سرطان سینه. 11

1-3-1-انواع سرطان سینه. 12

1-3-2-علائم سرطان سینه. 16

1-3-3-اپیدمیولوژی سرطان سینه. 17

1-3-4-عوامل خطر. 18

1-3-5-مرحله­بندی سرطان سینه: 21

1-3-6-تشخیص بیماری.. 23

1-3-7-درمان بیماری: 25

1-4-اهمیت ژن­ها در تحقیقات مرتبط با سرطان. 28

1-4-1-ژن BIF-1. 28

1-5-بیان مساله. 33

1-5-1-اهمیت و ضرورت پژوهش… 34

1-5-2-اهداف پژوهش… 35

1-5-3-پیشینه پژوهش… 35

1-5-4-روش پژوهش… 35

1-5-5-موانع و مشکلات پژوهش… 36

1-5-6-سازماندهی پژوهش… 36

فصل دوم: مواد و روش ها 37

2-1-انتخاب گروه بیماران و گروه کنترل. 38

2-1-1-نمونه­گیری.. 39

2-2-آماده سازی بافت جهت استخراج RNA.. 39

2-2-1-استخراج RNA  از نمونه بافت.. 40

2-3-بررسی کمی  RNAاستخراج شده 43

2-3-1-اسپکتروفتومتری.. 43

2-4-بررسی بیان ژن. 44

2-5-طراحی پرایمر. 44

2-5-1-محلول­های ذخیره پرایمرها 48

2-6-واکنش رونویسی معکوس(Reverse Transcription) 48

2-6-1-سنتز cDNA.. 48

2-6-1-1-کنترل و بررسی  cDNA های سنتز شده 51

2-6-2-واکنش زنجیره­ای پلیمراز 52

2-7-الکتروفورز محصولات RT-PCR بر روی ژل آگارز 56

2-7-1-جداسازی به روش الکتروفورز 57

2-8-Real Time RT-PCR.. 62

2-8-1-تعريف ومفهوم Real-Time PCR 62

2-8-2-مزاياي روش   Real-Time PCR.. 62

2-8-3-تکنیک Real Time RT-PCR SYBR GREEN.. 63

2-8-4-تقسیم­بندی روند انجام واکنش Real Time RT-PCR.. 64

2-8-4-1-آزمون Real Time RT-PCR.. 66

2-9-آناليز آمارى.. 69

2-9-1-مدل ریاضی مورد استفاده برای آنالیز بیان ژن. 69

2-9-2-روش rrCT 2. 70

2-9-3-روش پی فافل.. 70

2-9-4-روش­های برآورد کارائی تکثیر. 71

2-10-تعیین میزان بیان ژن­هایBIF-1  و  b-ACTIN.. 72

فصل سوم: نتایج. 73

3-1-اطلاعات بیماران. 74

3-2-نتايج كنترل كیفي RNA استخراج شده 75

3-3-نتایج کنترل کیفیت  cDNAهای سنتز شده با روش RT-PCR.. 76

3-3-1-الکتروفورز بر روی ژل آگارز 76

3-4- نتایج RT-PCR برای ژن­های BIF-1 و b-ACTIN.. 77

3-5-نتایج Real Time RT-PCR ژن BIF-1. 78

3-6-نتایج Real Time RT-PCR ژن b-ACTIN.. 79

3-7-تایید تکثیر نواحی هدف ژن BIF-1. 80

3-8-بررسی­های آماری.. 81

3-8-1-آنالیز نمونه­ها از نظر سطح بیان ژن BIF-1. 81

3-8-2-بررسی معنی­دار بودن آماری اطلاعات.. 81

3-8-3-میزان بیان و وضعیت بیان ژن BIF-1. 82

3-8-4-کمی کردن میزان بیان ژن­ها 83

3-9-ارتباط بین بیان ژن BIF-1 و علائم کلینیکی و پاراکلینیکی.. 84

3-9-1-نتایج ارتباط گیرنده های هورمونی با بیان ژن BIF-1. 84

3-9-2-ارتباط وضعیت هیستوپاتولوژیکی بیماران و بیان BIF-1. 86

3-9-3-ارتباط مرحله­ی سرطان بیماران با بیان ژن BIF-1. 86

3-9-4-ارتباط اندازه تومور بیماران با بیان ژن BIF-1. 87

3-9-5-ارتباط درگیری غدد لنفاوی با بیان ژن BIF-1. 87

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری.. 88

4-1-بحث.. 89

4-2-بررسي بيان BIF-1 در مبتلايان به سرطان سینه. 90

4-3-نتیجه گیری.. 95

4-4-پیشنهادات.. 97

منابع و مآخذ. 98

فهرست جدول ها

عنوان                                                                                                                                             صفحه

جدول 1-1. ابتلا به سرطان پستان و مرگ و میر ناشی از آن. 3

جدول 1-2. مشخصات پنج گروه اصلی مولکولی سرطان پستان. 13

جدول 1-3. طبقه­بندی تومورها به روشTNM   19

جدول 1-4. طبقه­بندی تومورها به روش  Grading 20

جدول 1-5. مهمترين ملكول­هاى درگير در آپوپتوز 31

جدول 2-1. مشخصات پرایمرهای واکنش­های RT-PCR و  Real Time PCR.. 47

جدول 2-2. اجزای واکنش RT-PCR 55

جدول 2-3. برنامه­های حرارتی واکنش­های RT-PCR برای ژن BIF-1. 55

جدول 2-4. اجزای واکنش Real Time RT-PCR.. 67

جدول 2-5. برنامه حرارتی در واکنش­های Real Time RT-PCR.. 67

جدول 3-1. خصوصیات دموگرافیک تومورهای بررسی شده 74

جدول 3-2. مقایسه میزان بیان و وضعیت بیان ژن BIF-1   82

جدول 3-3. بیان ژن BIF-1 در ارتباط با گیرنده­های هورمونی.. 84

فهرست اشکال

عنوان                                                                                                                              صفحه

شکل 1-1، مقایسه سرطان مهاجم و سرطان غیرمهاجم. 6

شکل 1-2، مقایسه تقسیم سلول سرطانی با سلول طبیعی.. 7

شکل 1-3، اجزای بافت پستان. 14

شکل 1-4، شمایی از سرطان مجرایی مهاجم. 15

شکل 1-5، مقایسه بافت نرمال و بافت مبتلا. 16

شکل 1-6، ماموگرافی.. 24

شکل 2-1، شمایی از جداسازی محلول حاویRNA . 42

شکل 2-2، نحوه تشکیل دایمر پرایمر در واکنش PCR 45

شکل 2-3، نقش انتهای ´3 پرایمر در تکثیر صحیح توالی هدف.. 46

شکل 2-4، نتایج تایید کننده صحت پرایمرهای ژن BIF-1 با استفاده از Primer BLAST. 46

شکل 2-5، نتایج تایید کننده صحت پرایمرهای ژن b-ACTIN با استفاده از Primer BLAST. 47

شکل2-6، RT-PCR   49

شکل2-7، الکتروفورز محصولات RT-PCR برای ژن GAPDH بر روی ژل. 51

شکل 2-8، مراحل انجام PCR.. 54

شکل2-9، نمونه­ای از الکتروفورز محصول RT-PCR برای ژن BIF-1 بر روی ژل  57

شکل 2-10، اجزای دستگاه الکتروفورز 58

شکل 2-11، پودر آگارز قبل از حل شدن. 60

شکل 2-12، پودر آگارز پس از حرارت دهی و حل شدن. 60

شکل2-13، الکتروفورز محصول RT-PCR برای ژن b-ACTIN بر روی ژل. 61

شکل 2-14، مکانیسم عمل SYBR Green. 63

شکل 2-15، واكنشReal time RT-PCR  . 64

شکل2-16، شمایی از چهار فاز روند انجام واکنشReal time RT-PCR    65

شکل 2-17، سيكل آستانه. 66

شکل2-18، نرم افزار لینرگ.. 72

شکل 3-1، نتایج حاصل از الکتروفورز  RNAاستخراج شده بر روی ژل آگارز 75

شکل 3-2، نتایج کنترل کیفیت cDNA های سنتز شده برای ژن GAPDH.. 76

شکل 3-3، نتایج RT-PCR برای ژن BIF-1. 77

شکل 3-4، نتایج RT-PCR ژنb-ACTIN   در بافت­های توموری و سالم. 78

شکل3-5، نتایج تایید تکثیر BIF-1 در بافت توموری.. 80

فهرست نمودارها

  عنوان                                                                                                                                          صفحه

نمودار 2-1. نمودار منحنی ذوب ژن BIF-1. 68

نمودار 2-2. نمودار منحنی ذوب ژن bACTIN.. 68

نمودار 3-1. نمودار تکثیر ژن BIF-1. 78

نمودار 3-2. منحنی ذوب ژن BIF-1 به همراه کنترل منفی.. 79

نمودار 3-3. نمودار تکثیر ژن b-ACTIN.. 79

نمودار 3-4. نمودار منحنی ذوب ژن  b-ACTIN.. 80

نمودار 3-5. نتیجه کلی آنالیز با نرم افزار REST. 81

نمودار 3-7. نتایج سنجش بیان ژن BIF-1 در تومورهای سینه. 83

نمودار 3-8. میانگین بیان ژن BIF-1 در گروه­های مختلف توموری.. 85

نمودار 3-9. پراکنش بیماران بر اساس مرحله ی تومور 86

نمودار 3-10. پراکنش بیماران بر اساس اندازه ی تومور 87

نقد و بررسی‌ها

هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.

اولین کسی باشید که دیدگاهی می نویسد “بررسی بیان ژن BIF-1 در سرطان سینه و ارتباط آن با خصوصیات هیستوپاتولوژیکی(وضعیت grade وStage) و گیرنده¬های هورمونی(PR ,ER ,HER2) تومور”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo