%53تخفیف

تاثیر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه ای بر پرتوانی تودهی سلولی داخلی بلاستوسیست موش از طریق بررسی میزان بیان ژن Klf4

تاثیر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه ای بر پرتوانی تودهی سلولی داخلی بلاستوسیست موش از طریق بررسی میزان بیان ژن Klf4

تعداد74 صفحه در فایل word

از تکنولوژیهای کمک باروری میتوان لقاح آزمایشگاهی ( In vitro Fertilization:IVF) و به تبع آن انجماد و ریز دستکاری مصنوعی را نام برد. پس از فرایند لقاح و ترکیب اسپرم و تخمک مراحل تکوینی جنین شروع میشود که پس از عبور از مرحلهی 2، 4، 8 سلولی، مورولا و در نهایت بلاستوسیست حاصل شده که این مراحل، مراحل تکوین پیش از لانه گزینی نامیده میشود. انجماد جنینهای باقی ماندهی حاصل از IVF شانس دستیابی به حاملگی را بدون نیاز به انجام مجدد سیکل IVF افزایش میدهد. یک عامل مهم افزایش میزان موفقیت انجماد جنین، مشخص کردن مناسبترین مرحله تکاملی جنین برای انجماد در جهت افزایش بقاء جنین پس از ذوب میباشد. انجماد جنین در تمام مراحل امکانپذیر است. هرچه تعداد سلولها بیشتر باشد احتمال آسیب جنین پس از ذوب و یخ گشایی کمتر است و بازده انجماد بیشتر است اما پس از مرحله 8 سلولی و طی Compaction morulla بدلیل افزایش اتصالات و چسبندگی بلاستومرها امکان ورود و خروج مواد سرمامحافظ و آب مشکل است و نرخ انجماد پایین آمده و بعد از پدیدهی Cavitation و تجمع آب و وسیع شدن حفره بلاستوسل انجماد جنین در مرحله بلاستوسیست با مشکل روبروست. در واقع مایع حفره بلاستوسل تشکیل کریستال و در نتیجه صدمه به ساختار سلولی را فراهم میسازد. در این مطالعه در نظر داریم با سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست قبل از انجماد، حجم مایع بلاستوسل را کاهش داده و تاثیر آن را بر کیفیت جنین از نظر میزان زندهمانی و میزان بیان ژن Klf4 پس از یخ گشایی مورد ارزیابی قرار دهیم. هدف: بررسی تاثیر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد بر میزان زنده مانی و کیفیت جنینها و بیان ژن klf4 پس از یخ گشایی. روش کار: در این تحقیق دو گروه از بلاستوسیستها استفاده شدند. گروه اول بلاستوسیستهای حاصل از لقاح آزمایشگاهی (گروه برونتنی) و گروه دوم بلاستوسیستهای درونتنی. بلاستوسیستهای هر گروه به صورت تصادفی به 5 گروه تقسیم شده و مورد مطالعه قرار گرفتند. در گروه اول، بلاستوسیستها پس از سوراخ مصنوعی و در گروه دوم بلافاصله پس از استحصال در محلول انجماد شامل اتیلن گلیکول 15% + DMSO 15% + ساکارز 5% مولار منجمد و سپس یخ گشایی شدند. در گروه سوم، بلاستوسیستها سوراخ مصنوعی شدند. در گروه چهارم، بلاستوسیستها بدون تماس با ازت مایع، در محلولهای انجماد و ذوب غوطهور گشتند. میزان زنده مانی و قابلیت خروج بلاستوسیست از زونا بررسی و همچنین بیان ژن Klf4 توسط تکنیک Real time در گروههای مذکور ارزیابی و نهایتاً با گروه کنترل(گروه پنجم: بدون تیمار) مقایسه شدند. نتایج حاکی از افزایش میزان زنده مانی، خروج بلاستوسیست از زونا و همچنین میزان بیان ژن Klf4 میباشد. بنابراین AC بلاستوسیست قبل از انجماد میتواند به عنوان یک روش ساده و موثر برای بهبود تکنیک انجماد بلاستوسیست مطرح گردد.

کلمات کلیدی: سوراخ کردن مصنوعی، بلاستوسیست، انجماد شیشهای، بیان ژن klf4

دسته: زیست شناسی, علوم تجربی برچسب: انجماد شیشهای, بلاستوسیست, بیان ژن klf4, کلمات کلیدی: سوراخ کردن مصنوعی

توضیحات

1 فصل 1 2

1-1 گامتوژنز 3

1-2 لقاح 4

1-3 تکوین 5

1-3-1 تسهیم 5

1-3-2 اولین تمایز دودمان جنینی 7

1-3-3 دومین تمایز دودمان جنینی 11

1-3-4 حفره سازی 12

1-4 تکنیکهای کمک باروری 14

1-4-1 لقاح مصنوعی 14

1-4-2 انجماد 15

1-5 سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیت 21

2 فصل 2 24

2-1 انتخاب حیوان 24

2-2 لقاح آزمایشگاهی 26

2-2-1 استحصال اسپرم 26

2-2-2 آمادهسازی محیط و قطرهها 26

2-2-3 استحصال تخمک 28

2-2-4 لقاح 29

2-2-5 کشت جنین آزمایشگاهی 31

2-3 استحصال بلاستوسیست 31

2-3-1 تحریک تخمک گذاری 31

2-3-2 جفت گیری 31

2-3-3 آماده سازی محیط و قطره گذاری 32

2-3-4 استحصال بلاستوسیست 32

2-4 انجماد شیشهای 32

2-4-1 آماده سازی محیط و قطره گذاری 32

2-4-2 فرایند انجماد 33

2-5 عمل ذوب 34

2-5-1 آماده سازی محیط و قطره گذاری 34

2-5-2 فرایند ذوب 34

2-6 سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست 35

2-6-1 آماده سازی محیط و قطره گذاری 35

2-6-2 سوراخ کردن بلاستوسیست 35

2-7 چگونگی بررسی بیان ژن 36

2-7-1 استخراج RNA از بلاستوسیست 36

2-7-2 سنتز DNA مکمل 38

2-7-3 تست cDNA ی سنتز شده 38

2-7-4 طرز تهیه ی ژل آگاروز 5/1 39

2-7-5 رنگ آمیزی ژل الکتروفورز 39

2-7-6 طراحی پرایمر 40

2-7-7 واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی 40

2-7-8 آنالیز دادهها 41

2-8 طراحی آزمایش: 42

3 فصل 3 44

3-1 اثر انجماد شیشهای و سمیت مواد سرما محافظ بر کیفیت بلاستوسیستهای درون تنی موش 44

3-2 اثر کاهش حجم مایع بلاستوسل بر کیفیت بلاستوسیستهای درونتنی موش 45

3-3 اثر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشهای بر کیفیت بلاستوسیستهای درونتنی موش 45

3-4 اثر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشهای بر کیفیت بلاستوسیستهای برونتنی موش 47

3-5 منحنی ذوب 48

3-6 واکنش زنجیره ای پلیمراز 49

4 فصل 4 51

نتیجه گیری 57

پیشنهادها 57

فهرست تصاویر

شکل ‏1‑1: گامتوژنز (A: اسپرماتوژنز- B: ائوژنز) [2] 4

شکل ‏1‑2: تصویر شماتیک از بر همکنش اسپرم و تخمک [3] 5

شکل ‏1‑3: تسهیم چرخشی پستانداران [3]. 6

شکل ‏1‑4 : قطبی شدن سلول ها بر اساس قرار گیری محور تقسیم [7]. 7

شکل ‏1‑5: مرکز تنظیم رونویسی در سلولهای بنیادی جنینی موش [10] 9

شکل ‏1‑6: جدا شدن دو دودمان تروفوکتودرم و توده سلولی داخلی بر اساس مسیر هیپوسیگنالینگ [13]. 9

شکل ‏1‑7: مدل کلاسیک تشکیل دودمان جنینی بر اساس A: مدل داخلی-خارجی و B: مدل قطبیت سلولی [14]. 10

شکل ‏1‑8: جدا شدن دو دودمان جنینی تروفوکتودرم و توده سلولی داخلی بر اساس بیان ژن [15]. 10

شکل ‏1‑9: تفکیک دودمان اپیبلاست و اندودرم اولیه [16] 11

شکل ‏1‑10: منحنی مربوط به تمایز PE و Epi در حضور سیگنالینگ Fgf [10]. 12

شکل ‏1‑11: تصویر شماتیک از عملکرد پمپهای سدیم-پتاسیم در روند حفره سازی [12] . 13

شکل ‏1‑12: مراحل مختلف تکامل جنین پستانداران [19]. 13

شکل ‏1‑13: ضدیخهای نفوذ ناپذیر 17

شکل ‏1‑14: ضدیخ های نفوذ پذیر 18

شکل ‏1‑15: A: موقعیت قرارگیری ICM در هنگام AC [61]. 22

شکل ‏2‑1: موش نژاد NMRI 25

شکل ‏2‑2: اتاق نگهداری از حیوانات مجهز به سیستم تهویه مجزا 25

شکل ‏2‑3: نحوهی کشتن موش به روش جابجایی مهرهی گردن 26

شکل ‏2‑4: جراحی موش الف: برش در پوست ب: برش پردهی صفاقی 27

شکل ‏2‑5: جداسازی اپیدیدیم و اسپرم 28

شکل ‏2‑6: تزریق داخل صفاقی 29

شکل ‏2‑7 : جراحی و جداسازی تخمک 30

شکل ‏2‑8: بررسی پلاک واژینال 31

شکل ‏2‑9 : قطرهگذاری محیط انجماد 33

شکل ‏2‑10: فرایند انجماد 33

شکل ‏2‑11: قطرهگذاری محیط ذوب 34

شکل ‏2‑12: فرایند ذوب 35

شکل ‏2‑13: دستگاه میکرومنیپولیتور 36

فهرست جداول

جدول ‏1‑1: خصوصیات ضد یخهای نفوذ ناپذیر 17

جدول ‏1‑2: خصوصیات ضدیخهای نفوذپذیر 18

جدول ‏2‑1: مواد و برنامهی سنتز cDNA 38

جدول ‏2‑2: مواد واکنش PCR 38

جدول ‏2‑3: برنامه زمانی PCR 39

جدول ‏2‑4: توالی و مشخصات ژنهای B2m و Klf4 40

جدول ‏2‑5: ترکیبات مورد نیاز جهت Real Time 41

جدول ‏2‑6: برنامه زمانی Real Time 41

جدول ‏3‑1: اثر انجماد شیشهای و سمیت مواد سرمامحافظ بر کیفیت بلاستوسیستهای درونتنی موش 44

جدول ‏3‑2: اثر سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست بر کیفیت رویانهای درونتنی موش 45

جدول ‏3‑3: اثر انجماد شیشهای پس از سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست بر کیفیت رویان درونتنی موش 46

جدول ‏3‑4: اثر سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست قبل از انجماد شیشهای بر کیفیت رویان برونتنی موش 47

امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی: 45,000 تومان بود.قیمت فعلی: 21,000 تومان.

تاریخ ایجاد آذر 8, 1399
تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
فروش 0
دیدگاه 0

شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:

دسترسی به فایل به صورت همیشگی
پشتیبانی رایگان
پشتیبانی 24 ساعته محصول
بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری

مشاهده قوانین سایت