دانلود :بررسی اثرات سمیت نانولوله کربنی تک دیواره بر سلول­های سرطانی پستان در شرایط برون­ـ­تن

عنوان                                                          فهرست                                                         صفحه 

چکیده. 1

مقدمه. 2

فصل اول: کلیات

1-1-سرطان پستان. 4

1-2- اپیدمیولوژی.. 5

1-3- عوامل علت شناختی.. 5

1-3-1- اضافه وزن. 6

1-3-2- نداشتن فعالیت جسمی.. 7

1-3-3- الکل. 7

1-3-4- رژیم غذایی.. 8

1- 3-5- سیگار 9

1-3-6- هورمون­های استروئیدی و گیرندههایشان. 9

1-3-6-1- هورمون­های استروئیدی.. 9

1-3-6-2- گیرندههای هورمون­های استروئیدی.. 10

1-3-6-3-  تاریخچه حاملگی و شیردهی.. 11

1-3-6-4-  استروژن. 12

1-3-6-5-  هورمون جایگزین درمانی.. 12

1-3-7-  مصرف داروی خوراکی ضد بارداری.. 13

1-3-8-  کار در شب و عوامل محیطی.. 14

1-3-9- سن.. 14

1-3-10- جنسیت.. 15

1-3-11- تاریخچه فعال بودن جنسی.. 15

1-3-12-  تاریخچه خانوادگی.. 16

1-3-13- تاریخچه شخصی.. 16

1-3-14- تغییرات سلولی پستان، زخم و جراحت پستان. 17

1-3-15- مصرف دی اتیل ستیل بسترول. 17

1-3-16- سابقه بیماری خوش خیم پستان. 17

1-3-17- ژنهاي پر خطر. 18

1-3-18- سندرم های پرخطر. 19

1-3-19- نقش آنتی ژن HER2/neu. 20

1-3-20- تراکم ماموگرافی.. 20

1-4- فرضيه های چگونگي تشکيل و منشا تومورها 20

1-5- ناهمگني ‌سرطان پستان. 21

1-6- انواع سرطان پستان. 22

1-6-1- سرطان پستان لومينال A و  B. 22

1-6-2-  سرطان پستان HER2+: 22

1-6-3-  شبه بازال. 22

1-7- مرحله بندی سرطان. 22

1-7-1- مرحله صفر. 23

1-7-2- مرحله اول. 23

1-7-3- مرحله دوم. 23

1-7-4- مرحله سوم. 24

1-7-5- مرحله چهارم. 24

1-8- نانو در درمان و پیشگیری سرطان. 24

1-9- نانولوله های کربنی.. 26

1-9-1- خصوصيات نانولوله های کربنی.. 26

1-9-2-کاربرد به عنوان حامل دارویی.. 28

1-9-3- پراکنده کردن نانولوله کربنی در حلال. 28

1-9-4- عاملدار کردن نانولوله کربني.. 29

1-9-4-1- روش کووالان. 29

1-9-4-2- روش غيرکووالان. 30

1-9-4-3- پگيلاسیون برای بهبود ويژگيها در کاربردهای زيستی.. 31

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

2-1- تجویز، جذب و انتقال CNT. 33

2-2- تجویز وریدی.. 34

2-3- کاربرد نانوکربن تیوب تک دیواره و ایمنی زیستی.. 35

2-3-1- ایمنی زیستی نانولوله تک دیواره به عنوان حامل دارویی.. 36

2-4-  کاربرد در درمان هدفمند. 37

2-5- کاربرد در ژن رسانی.. 38

2-6- کاربرد در سيستمهای دارورسانی هدفمند برای درمان سرطان. 38

فصل سوم: مواد و روش­ها

3-1- مواد و روش‌ها 42

3-1-1- مواد. 42

3-1-2-ویژگیهای نانوذرات کربنی.. 43

3-2- روش ها 45

3-2-1- کشت و تیمار سلولی.. 45

3-2-1-1- رده های سلولی مورد استفاده 45

مشخصات کلی سلول. 46

نام رده سلولی.. 46

3-2-1-2- دفريز كردن سلول‌هاي منجمد. 47

3-2-1-3- فريز كردن سلول‌ها 47

3-2-1-4- محلول ها و بافرهای مورد نیاز 48

3-2-1-4-1- بافر فسفات نمکی(PBS) 48

3-2-1-4-2-  محیط کشت کامل. 48

3-2-1-5-تست گذاری سلول ها 49

3-2-1-5-1- شمارش سلول ها 49

3-2-1-5-3-بررسی زنده بودن سلول‌ها با استفاده از روشMTT. 50

3-2-1-5-4- تعیین IC-50. 51

3-2-1-5-5- سنجش میزان رهاسازی آنزیم لاکتات دهیدروژناز به محیط کشت.. 52

3-2-1-5-6- رنگ آمیزی با 33258Hoechst 52

فصل چهارم: نتایج

4-1- سمیت القا شده توسط نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر روی سلول‌های HUV-EC-C, MCF-7 وPC12  54

4-2- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سرنوشت سلول MCF-7 به وسیله سنجش MTT. 55

4-3- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سرنوشت سلول MCF-7 به وسیله سنجش LDH.. 59

4-4- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سرنوشت سلول  HUVECبه وسیله سنجش MTT. 62

4-5- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سرنوشت سلولHUVEC  به وسیله سنجش LDH   65

4-6- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سلول PC12به وسیله سنجش MTT. 69

4-6- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی بر سلول  PC12به وسیله سنجش LDH.. 71

4-7- سمیت القا شده توسط نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر روی سلول‌های HUV-EC-C, MCF-7وPC12. 75

4-8- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول MCF-7 به وسیله سنجش MTT. 76

4-9- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول MCF-7 به وسیله سنجش LDH.. 77

4-100- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول  HUVECبه وسیله سنجش MTT. 78

4-11- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول  HUVECبه وسیله سنجش LDH.. 79

4-12- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول  PC12به وسیله سنجش MTT. 80

4-13- بررسی تاثیر نانولوله تک دیواره کربوکسیله بر سرنوشت سلول  PC12به وسیله سنجش LDH.. 81

4-14-  القا مرگ آپوپتوزی.. 82

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

5-1-بحث.. 85

5-2-پیشنهاد. 94

منابع. 95

خلاصه انگلیسی.. 102

ضمائم. 103

عنوان                                                     فهرست جداول                                                      صفحه

جدول 3-1-مشخصات کلی رده­های سلولی.. 46

جدول 5-1-مقادیرIC50 برای هردو نانوذره 88

جدول 5-2- مقایسه مقادیر به­دست آمده از آزمایش MTTو LDH پس از تاثیر 10 میکروگرم در میلی لیتر نانوذره کربوکسیله بر رده­های سلولی.. 89

جدول 5-3- مقایسه مقادیر به­دست آمده از آزمایش MTTو LDH پس از تاثیر 10 میکروگرم در میلی لیتر  نانوذره با گروه عاملی حلقوی بر رده­های سلولی.. 90

 عنوان                                               فهرست اشکال                                              صفحه

شکل 2-1 تصویری شماتیک از نانوبمب های نانولوله کربنی و فولرن. 40

شکل 3-1- تعیین خصوصیت نانو دزات کربنی.. 44

شکل 3-2-تصویرAFM.. 45

شکل 3-2اساس سنجش MTT. 51

شکل4-1-حیات سلول‌های HUV-EC-C, MCF-7 و PC12  قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره عاملدار شده با گره حلقوی به مدت 48 ساعت.. 54

شکل4-2-حیات سلول‌های  MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 48 ساعت.. 55

شکل4-3-حیات سلول‌های  MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 48 ساعت.. 56

شکل4-4-حیات سلول‌های  MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 72 ساعت.. 57

شکل4-5-حیات سلول‌های  MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت24، 48 و72 ساعت.. 58

شکل4-6- ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 24 ساعت انکوباسيون سلولهاي MCF-7 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 59

شکل4-7- ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 48 ساعت انکوباسيون سلولهايMCF-7 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف  نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 60

شکل4-8- ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 72 ساعت انکوباسيون سلولهاي MCF-7 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 61

شکل4-9-مقایسه ی ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون  محيط کشت پس از 24، 48 و72ساعت انکوباسيون سلولهاي MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی   62

شک 4-10حیات سلول‌های HUVECقرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 48 ساعت.. 63

شکل4-11-حیات سلول‌هایHUVEC قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 48 ساعت. 63

شکل4-12-حیات سلول‌هایHUVEC قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 72 ساعت.. 64

شکل4-13-حیات سلول‌های HUVEC  قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 24، 48 و72 ساعت.. 65

شکل4-14- ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 24 ساعت انکوباسيون سلولهاي HUVEC قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 66

شکل4- 15ميزان رهاسازي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 48 ساعت انکوباسيون سلول HUVEC قرار گرفته در معرض غلظت‌ مختلف نانولوله  با گروه عاملی حلقوی.. 67

شکل4-16- ميزان رها سازي لاکتات دهيدروژناز به محيط کشت پس از 72 ساعت انکوباسيون. 67

شکل4-17-مقایسه ی ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از  24، 48 و72ساعت انکوباسيون سلولهاي HUVEC قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 68

شکل4-18-حیات سلول‌های PC12 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 24 ساعت.. 69

شکل 4-19حیات ‌PC12   در معرض غلظت‌های مختلف نانولوله با گروه عاملی حلقوی به مدت 48 ساعت.. 70

شکل4-20-حیات سلول‌هایPC12 قرار گرفته در معرض غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی به مدت 72 ساعت.. 70

شکل4-21-مقایسه حیات سلول‌هایPC12 قرار گرفته در معرض غلظت‌های مختلف نانولوله با گروه عاملی حلقوی به مدت 24، 48 و 72 ساعت.. 71

شکل4-22- ميزان رهاسازي آنزيم لاکتات دهيدروژناز به محيط کشت پس از 24ساعت انکوباسيون سلولهايPC12 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 72

شکل4-23- ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 48ساعت انکوباسيون سلولهايPC12 قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی.. 73

شکل4-24- ميزان رهاسازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به محيط کشت پس از 72ساعت انکوباسيون   73

شکل4-25-مقایسه ی ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 24، 48 و 72ساعت انکوباسيون سلولهاي PC12قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره با گروه عاملی حلقوی   74

شکل4-26- حیات سلول‌های HUV-EC-C, MCF-7 و PC12  قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره کربوکسیله به مدت 48 ساعت.. 75

شکل4-27- مقایسه حیات سلول‌های MCF-7قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره کربوکسیله به مدت 24، 48 و 72 ساعت.. 77

شکل4-28- مقایسه ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از24 ، 48 و 72ساعت انکوباسيون سلولهايMCF-7  قرار گرفته در مجاورت غلظت‌های مختلف نانولوله تک دیواره کربوکسیله  78

شکل4-29-مقایسه حیات سلول‌هایHUVEC. 79

شکل4-30- مقایسه ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز به درون محيط کشت پس از 24، 48 و 72  80

شکل 4-31- مقایسه حیات سلول‌های PC12. 81

شکل4-32- مقایسه ميزان آزاد سازي آنزيم سيتوپلاسمي لاکتات دهيدروژناز 82

شکل4-33- القای مرگ آپپتوزی.. 83

شکل 5-1-مقایسه نتایج به دست آمده از سنجش  MTT و LDH. 86

شکل5-2-مقایسه نتایج به دست آمده سنجش MTT و LDH.. 87