%34تخفیف

بیان هترولوگ AKAP4 سگ

بیان هترولوگ AKAP4 سگ

بخش علوم دامی

کارشناسی ارشد علوم دامی

گرايش مهندسی ژنتیک و اصلاح نژاد دام

بیان هترولوگ AKAP4 سگ

چکیده:

به منظور نگه داشتن اندازه جمعیت سگها در حد مطلوب، گاه نیاز به استفاده از تکنیکهای کنترل جمعیت میباشد. اخته کردن و نابارورسازی با استفاده از سیستم ایمنی از معدود استراتژیهای کنترل باروری به حساب میآیند. در این پروژه تحقیقاتی پروتئین نوترکیب AKAP4 موجود در اسپرم سگ به طور غیرمتجانس بیان گردید. تولید واکسن علیه باروری درجمعیت سگها می تواند یکی از دستاوردهای نهایی و آتی این طرح به شمار آیند. AKAP4 در محدوده غلاف فیبری دم اسپرم قرار گرفته است و میتواند هدف سرکوب ایمنی قرار گیرد و به دنبال آن حرکت اسپرم را متوقف نماید. Total RNA از بافت بیضه استخراج گردید و cDNA با استفاده از RT-PCR سنتز گردید. AKAP4 با اندازه 429 جفت باز توسط واکنش زنجیرهای آشیانهای تکثیر یافت. پس از تأیید تعیین توالی، ژن در ناقل کلونی pTG19-T همسانه شد و در باکتریE. coli مستعد سوش DH5a ترانسفورم گردید. به منظور بیان ژن، ژن در ناقل بیانی pQE60 همسانه و در باکتریE. coli مستعد سوش BL21 ترانسفورم گردید. بیان AKAP4 با استفاده از روش SDS-PAGE تأیید گردید و پروتئین AKAP4 با استفاده از ستون کروماتوگرافی نیکل- سفارز خالص شد.

کلید واژه: همسانه سازی، بیان ژن، پروتئین نوترکیب، اسپرم سگ، باروری، AKAP4

دسته: فنی و مهندسی, کشاورزی و منابع طبیعی برچسب: AKAP4, اسپرم سگ, باروری, بیان ژن., پروتئین نوترکیب, کلید واژه: همسانه سازی

توضیحات

فهرست مطالب

پیشگفتار……………………………………………………………………………………………………………………….. 1

فصل اول: مقدمه و مروری بر پژوهشهای پیشین

1-1. اسپرم…………………………………………………………………………………………………………………… 6

1-1-1. ریخت شناسی اسپرم…………………………………………………………………………………………… 6

1-1-2. ترکیب شیمیایی اسپرم………………………………………………………………………………………… 6

1-1-3. اسپرم سازی……………………………………………………………………………………………………… 8

1-1-4. اسپرمیوژنسیز (دگردیسی اسپرماتید)……………………………………………………………………… 9

1-1-5. اسپرم ریزی……………………………………………………………………………………………………… 13

1-2. باروری……………………………………………………………………………………………………………….. 13

1-2-1. پروتئینهای سطحی اسپرم………………………………………………………………………………….. 13

1-2-2. تولید مثل حیوانات اهلی و ضرورت کنترل آن……………………………………………………….. 18

1-2-2-1. تنظیم غدد ترشحی (استروئیدها)……………………………………………………………………… 18

1-2-2-2. جلوگیری از باروری با استفاده از تلقیح واکسن………………………………………………….. 19

1-2-3. آنتیبادیهای ضد اسپرمی (ASA)…………………………………………………………………….. 20

1-3. ساختار آنتیبادیها…………………………………………………………………………………………………….. 23

1-3-1. تاثیر آنزیمهای پروتئولیتیک…………………………………………………………………………………….. 27

1-3-2. ساختار و بعضی از خواص ردههای مختلف آنتیبادی…………………………………………………… 27

1-4. تولید آنتیبادیهای مونوکلونال و پلیکلونال………………………………………………………………….. 31

1-5. تولید پروتئینهای نوترکیب به منظور دستیابی به آنتیبادیهای ضد باروری…………………………. 34

1-6. انتخاب ژن کاندیدا به منظور دستیابی به آنتیبادیهای ضد باروری……………………………….. 34

1-7. مروری بر پژوهشهای پیشین……………………………………………………………………………………….. 35

فصل دوم: مواد و روشها

2-1. مواد و تجهیزات مورد استفاده در این پژو……………………………………………………………………… 41

2-2 مراحل پژوهش………………………………………………………………………………………………………… 41

2-2-1. تهیه بافت………………………………………………………………………………………………………………. 41

2-2-2. استخراج RNA با استفاده از TRIzol……………………………………………………………………… 42

2-2-3. سنتز cDNA (RT-PCR)…………………………………………………………………………………….. 42

2-2-4. طراحی آغازگرهای اختصاصی ژن AKAP4……………………………………………………………… 43

2-2-5. تکثیر توالی هدف ژن AKAP4 به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز آشیانهای 45

2-2-6. تخلیص محصول PCR………………………………………………………………………………………….. 46

2-2-7. همسانه سازی ژن AKAP4 در ناقل کلونی pTG19-T…………………………………………….. 46

2-2-7-1. انجام واكنش الحاق (Ligation) محصول PCR با پلاسمید pTG19-T…………………… 46

2-2-7-2. مستعد كردن باكتری E. coli……………………………………………………………………………… 48

2-2-7-3. ترانسفورم كردن باكتری با استفاده از شوک حرارتی………………………………………………… 49

2-2-7-4. استخراج پلاسمید و تأیید همسانههای نوتركیب………………………………………………………… 49

2-2-8. همسانه سازی ژن AKAP4 در ناقل بیانی pQE60…………………………………………………….. 51

2-2-9. بیان ژن AKAP4………………………………………………………………………………………………….. 53

2-2-9-1. تهیه ژل SDS-PAGE……………………………………………………………………………………… 53

2-2-9-2. الکتروفورز پروتئینها به روش SDS-PAGE……………………………………………………….. 54

2-2-10. تخليص پروتئين‌ نوتركيب توسط ستون كروماتوگرافي ميل تركيبي نيكل تحت شرايط طبيعي…………………………………………………………………………………………………………………………….. 55

2-2-10-1. لیز باکتریها با دستگاه اولتراسونیک…………………………………………………………………… 55

2-2-10-2. مراحل تخليص پروتئين‌ نوتركيب تحت شرايط طبيعي……………………………………………. 56

فصل سوم: نتایج و بحث تحقیق

3-1. استخراج RNA از بافت بیضه، سنتز cDNA و تکثیر ژن AKAP4 به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز آشیانهای………………………………………………………………………………………………………………………… 58

3-2. خالص سازی محصول واکنش زنجیرهای پلیمراز آشیانهای……………………………………………… 60

3-3. همسانه سازی پلاسمید نوترکیب در باکتری E. coli سوش(DH1) DH5a………………… 60

3-4. تعیین توالی و ثبت AKAP4 در بانک جهانی……………………………………………………………….. 60

3-5. بررسی بیان AKAP4 و تخلیص پروتئین نوترکیب AKAP4………………………………………… 60

ضمیمه 1-فرهنگ لغات…………………………………………………………………………………………………….. 68

ضمیمه 2-مواد و تجهیزات………………………………………………………………………………………………. 70

منابع ……………………………………………………………………………………………………………………….. 71

امتیاز 0 از 5 از 0 دیدگاه

قیمت اصلی: 35,000 تومان بود.قیمت فعلی: 23,000 تومان.

تاریخ ایجاد دی 16, 1399
تاریخ بروزرسانی اسفند 13, 1401
فروش 0
دیدگاه 0

شرایط استفاده از محصول

تمام محصولات به ازای پرداخت پروژه تنها قابل استفاده می باشند. این بدین معنی است که برای استفاده از یک یا چند محصول ، لازم به خرید آن محصول است.

مزایای خرید این محصول:

دسترسی به فایل به صورت همیشگی
پشتیبانی رایگان
پشتیبانی 24 ساعته محصول
بازگشت وجه در صورت عدم رضایت مشتری

مشاهده قوانین سایت