بررسی تنوع ژنتیکی و بیوشیمیایی ژرم پلاسم‌ رازیانه استان کرمان وچند شهرایران با استفاده از مارکر مولکولیRAPDوکروماتوگرافی گازی

فهرست مطالب

عنوان                                                 شماره صفحه

فصل اول: مقدمه و کلیات

تاریخچه استفاده از گیاهان دارویی در ایران وجهان….. 2

مقدمه…………………………………. 3

فصل دوم : مروری بر منابع

2-1 معرفی رازیانه………………………. 8

2-1-1 گیاهشناسی رازیانه…………………. 8

2-1-2 پراکنش…………………………… 8

2-1-3  نیازهای اکولوژیکی………………… 9

2-1-4 فنولوژی………………………….. 9

2-1-5 خواص و کاربرد دارویی رازیانه………. 10

2-1-5-1 خواص دیگر رازیانه………………. 10

2-2 ترکیبات اسانس رازیانه………………. 11

2-2-1 آنتول…………………………… 12

2-2-2 لیمونن………………………….. 12

2-2-3 اوسیمن………………………….. 13

2-2-4 میرسن…………………………… 13

2-2-5 آلفاپینن………………………… 13

2-2-6 فنچون…………………………… 13

2-3 تنوع ژنتیکی و ضرورت شناخت آن………… 14

2-3-1 روش های  برآورد تنوع ژنتیکی……….. 15

2-3-1-1 برآورد تنوع ژنتیکی با استفاده از نشانگرهای DNA  16

2-4 نشانگرها………………………….. 17

2-4-1 نشانگرهای مورفولوژیکی…………….. 18

2-4-2 نشانگرهای پروتئینی……………….. 18

2-4-3 نشانگرهای مولکولی DNAو RNA………… 18

2-4-3-1 نشانگرهای DNAغیرمبتنی بر PCR…….. 19

2-4-3-2 نشانگرهای DNAمبتنی بر PCR……….. 19

2-5 نشانگر RAPD……………………….. 20

2-6 اسانس ها و کاربردها………………… 21

2-6-1 اسانس…………………………… 21

2-6-2 کاربرد اسانس…………………….. 22

2-6-3 اثرات اسانس بر بدن……………….. 23

2-6-4 استخراج اسانس……………………. 23

2-6-5 شناسایی ترکیبات موجود در اسانس…….. 24

2-6-6 انواع روش های جداسازی…………….. 24

2-6-6-1  کروماتوگرافی گازی……………… 24

2-6-6-2 اجزا تشکیل دهنده دستگاه گروماتوگرافی 25

2-6-7 طیف سنج جرمی…………………………………………………………………………………………26

2-7 تحقیقات انجام شده روی رازیانه……….. 28

2-7-1 تحقیقات انجام شده دیگر در خانواده چتریان با استفاده از تکنیک RAPD…………………………………. 29

2-7-2 تحقیقات انجام شده روی اسانس رازیانه… 31

فصل سوم : مواد وروش ها

3-1 بررسی تنوع ژنتیکی اکوتیپ های رازیانه با استفاده از مارکر RAPD 34

3-1-1 جمع آوری نمونه…………………… 34

3-1-2 کاشت بذور……………………….. 34

3-1-3 روش استخراج و خالص سازی DNA……….. 34

3-1-4 تعیین کمیت و کیفیت نمونه های DNA…… 35

3-1-4-1 الکتروفورز ژل آگارز…………….. 35

3-1-4-2 اسپکتروفتومتر………………….. 35

3-1-5 دستورالعمل RAPD-PCR……………….. 37

3-1-5-1 برنامه دمایی RAPD-PCR……………. 37

3-1-6 آغازگرها………………………… 38

3-1-7 الکتروفورز………………………. 40

3-1-7-1 تهیه بافر TBE…………………… 40

3-1-7-2 تهیه ژل آگارز………………….. 40

3-1-8 آنالیز داده های مربوط به RAPD……… 41

3-1-9 تجزیه به مولفه های اصلی…………… 41

3-2 مطالعه و بررسی ترکیبات اسانس رازیانه  با استفاده از گازکروماتوگرافی- جرمی

3-2-1 استخراج اسانس……………………. 42

3-2-2 آنالیز اسانس گیاه ……………….. 42

3-2-3 کروماتوگرافی گازی در شناسایی ترکیبات اسانس با استفاده از اندیس کواتس………………………………… 43

3-2-4 تفکیک اجزای اسانس………………… 45

3-2-5 شناسایی اجزای اسانس………………. 45

فصل چهارم : نتایج و بحث

4-1 نتایج حاصل از پرایمرها……………… 47

4-2 آنالیز داده ها…………………….. 48

4-3 تجزیه به مولفه های اصلی…………….. 49

4-4 بحث………………………………. 52

4-4-1 شرح زیرکلاس ها……………………. 53

4-5 آنالیز داده های حاصل از کارتوگرام……. 54

پیشنهادات…………………………….. 65

ضمائم………………………………… 66

منابع………………………………… 74

چکیده انگلیسی…………………………. 80