%46تخفیف

بررسی تنوع ژنتیکی جدایه های Fusarium oxysporum f. sp. ciceri عامل بیماری پژمردگی نخود در استان ایلام

تعداد94 صفحه در فایل word

کارشناسی ارشد در رشته بیماری­شناسی گیاهی

بررسی تنوع ژنتیکی جدایه های

Fusarium oxysporum f. sp. ciceri

عامل بیماری پژمردگی نخود در استان ایلام

 

چکیده

نخود مهم­ترين گياه از خانواده حبوبات در حوزه مديترانه، شبه قاره هند، غرب آسيا و شمال آفريقا است. بيماري پژمردگی نخود با عامل Fusarium oxysporum f. sp. ciceri یکی از مهم­ترين بيماري­های اين گياه در جهان به­شمار مي­رود. این بیماری در تمام مناطق نخودکاری ایران گزارش شده است. بیماری همه ساله در تمام مناطق نخودکاری استان ايلام باعث خسارت فراوانی می­شود بطوری­که در برخی از مزارع به 50 % تا 70 % هم میرسد. این تحقیق به منظور بررسی و تعیین تنوع ژنتیکی قارچ عامل بیماری زردی و پژمردگی نخود انجام گرفت. برای این منظور از مناطق نخودکاری استان شامل شش شهرستان از جمله آسمان­آباد، ایوان، بدره، چرداول، دره­شهر، سرابله نمونه­برداری صورت گرفت. پس از جداسازی، خالص­سازی و شناسایی قارچ عامل بیماری و معرفی F. oxysporum f. sp. ciceri به عنوان عامل غالب بیماری، بررسی تنوع ژنتیکی جدایه­ها با استفاده از پنج جفت نشانگر ریزماهواره صورت گرفت، نهایتاً در مجموع 17 آلل در بین جمعیت­ها مشاهده شد نتایج تجزیه واریانس مولکولی حاکی از تنوع بالای درون جمعیتی معادل 92 درصد و تنوع پایین بین جمعیت­های مناطق مختلف در حدود 8 درصد داشت. جریان ژنی (Nm) بالا و برابر 589/7 به­دست آمد. بنابراین تمایز ژنتیکی (Gst) به میزان کمی 0618/0 مشاهده گردید. دندروگرام رسم شده بر اساس فاصله ژنتیکی بین جمعیت­های مورد مطالعه در این تحقیق، نشان داد که جمعیت­های آسمان­آباد و سرابله در دو گروه جدا قرار گرفته­اند و نسبت به جمعیت-های دیگر تفاوت ژنتیکی بیشتری دارند. نتایج حاصل از این تحقیق در جهت کمک به متخصصین اصلاح نباتات و بیماری­شناسان گیاهی در جهت اصلاح ارقام نخود می­باشد.

کلیدواژه: نخود، Fusarium oxysporum f. sp. ciceri، تنوع ژنتیکی، ریزماهواره

فهرست مطالب

 

عنوان

صفحه

چکیده………………………………………………………………………………………………………..

د

فهرست مطالب……………………………………………………………………………………………..

ه

فهرست جدول­ها …………………………………………………………………………………………..

ی

فهرست شکل­ها…………………………………………………………………………………………….

ل

فصل اول

 

1-1-مقدمه………………………………………………………………………………………………….

2

فصل دوم

2-1- آشنایی با سیمای استان ایلام……………………………………………………….……………

5

2-1-1- آب و هوای استان ایلام……………………………………………………..…….…………

5

2-2- جایگاه تاریخی نخود………………………………………………………………………..……

6

2-3- اهمیت و جایگاه نخود در جهان و ایران…………………………………..…………………

6

2-4- گیاه­شناسی نخود…………………………………………………………..………………………

7

2-4-1- انواع نخود……………………………………………………..……..…………………………

7

2-4-2- ارزش غذایی دانه نخود………………………………………………………………………

8

2-5- موقعیت زراعی نخود در استان ایلام……………………………………………………..……

8

2-6- بیماری­های نخود……………………………………………………………………….…….……

8

2-6-1- بیماری پژمردگی فوزاریومی نخود………………………………………………..………

9

2-6-2- جنس فوزاریوم …………………………………………………………………………………

10

2-6-2-1- طبقه­بندی فوزاریوم………………………………………..………………………………

10

2-6-2-2- نامگذاری و طبقه­بندی…………………………………………….………………………

11

2-6-2-3- مرحله زادآوری جنسی……………………………………………………………………

11

2-6-2-4- مرحله غیرجنسی……………………………………………………………………………

11

2-6-3- همه­گیری بیماری………………………………………………………………………………

12

2-6-3-1- علائم بیماری………………………………………………………………………………..

12

2-6-3-2- چرخه بیماری………………………………………….……………………………………

13

2-6-3-3- شرایط محیطی………………………………………………………………………………

14

2-6-3-4- گسترش بیماری………………………………………….…………………………………

14

2-7- روش­های کنترل بیماری پوسیدگی ریشه نخود……………………………………………

15

2-7-1- روش زراعی……………………………………………………….……………………………

15

2-7-2- روش شیمیایی………………………………………………..…………………………………

15

2-7-3- مبارزه بیولوژیکی………………………………………………………………………………

15

2-7-4- ارقام مقاوم……………….………………………………………………………………………

15

2-8- تنوع بیماری­زایی و تنوع ژنتیکی .Fusarium ssp…………………………………………

16

2-8-1- بررسی تنوع ژنتیکی F. oxysporum با استفاده از نشانگرهای ……………..SSR

17

فصل سوم   

 

3-1- نمونه­برداری…………………………………………………………………………………………

24

3-2- جداسازی قارچ عامل بیماری از بافت­های گیاهی آلوده…………………………………

32

3-3- محیط کشت­های مورد استفاده…………………………………………………………………

32

3-3-1- محیط کشت­های جداسازی…………………………………………………………………

32

3-3-1-1- محیط کشت سیب­زمینی- دکستروز- آگار…………………………………………

32

3-3-1-2- محیط کشت پپتون- پنتاکلرونیتروبنزن- آگار………………………………………

33

3-3-2- محیط کشت­های خالص­سازی………………………………………..……………………

34

3-3-2-1- محیط کشت آب- آگار……………………………….…………………………………

34

3-3-3- محیط کشت­های شناسایی……………………………………………………………………

34

3-3-3-1- محیط کشت برگ میخک- آگار…………………………………..…………………

34

3-3-3-2- محیط کشت مواد غذایی خاص…………………..……………………………………

35

3-4- شناسایی قارچ عامل بیماری…………………………..…………………………………………

35

3-5- تهیه کشت خالص و نگهداری جدایه­ها………………………………………………………

36

3-5-1- روش تک اسپور کردن ………………………………………………………………………

36

3-5-2- روش نوک­هیف……………………………………………………….………………………

36

3-5-3- نگهداری کشت خالص قارچ……………………….………………………………………

37

3-6- محلول­های رنگی مورد استفاده برای رنگ­آمیزی و مشاهده­ی قارچ…………………

37

3-6-1- محلول اریتروزین………………………………………………………………………………

37

3-6-2- محلول آبی پنبه در آب………………………………………………………………………

37

3-7- بررسی آزمون بیماری­زایی در گلخانه………………..………………………………………

38

3-8- آزمایش­های مولکولی……………………………………………….…..………………………

38

3-8-1- استخراج DNA ……………………………………………………………………….………

38

3-8-1-1- مراحل استخراج DNA …………………………………………..………………………

39

3-8-2- بررسی کیفیت استخراج………………………………………………………………………

40

3-9- بررسی تنوع ژنتیکی جدایه­ با کمک نشانگرهای SSR……………………………..……

41

3-10- تجزیه و تحلیل داده­ها ………………………………………………….………………………

43

فصل چهارم

 

4-1- نتایج جداسازی جدایه­ها………………………………………….………………………………

45

4-1-1- مشخصات قارچ در محیط کشت PDA…………………….……………………………

45

4-2- آزمون بیماری­زایی………………..………………………………………………………………

46

4-3- نتایج تجزیه و تحلیل داده­های مولکولی……………………………………………..………

47

4-3-1- توزیع فراوانی آلل­ها در جمعیت­ها و جایگاه­های ریزماهواره……………….………

47

-3-2- ویژگی آغازگرهای استفاده شده برای جدایه­ها………………….………………………

48

4-3-3- آزمون مانتل………………………………………..……………………………………………

51

4-3-4- گروه­بندی جدایه­های F. oxysporum……………………..……………………………

52

4-3-5- تجزیه به مختصات اصلی در جدایه­های F. oxysporum مورد مطالعه………..…

55

4-4- تنوع ژنتیکی جمعیت­ها……………………………………………………..……………………

57

4-4-1- اطلاعات تنوع ژنتیکی پنج جایگاه SSR برای جمعیت­ها……………….……………

57

4-4-2- درصد چندشکلی در جمعیت­های مورد مطالعه…………………………………………

58

4-4-3- بررسی فاصله ژنتیکی و شباهت ژنتیکی در جمعیت­ها………………………..………

58

4-4-5- بررسی میزان جریان ژنی در جمعیت­ها……………………………………………………

60

4-4-6- تجزیه به مختصات اصلی و رسم بای­پلات بر اساس نشانگر SSR…………………

60

4-4-7- تجزیه واریانس مولکولی………………………………………………….…………………

61

4-5- بحث…………………………………………………………………………….……………………

62

4-5-1- نتیجه­گیری کلی……………………………..…..……………………….……………………

65

4-7- پیشنهادات……………………………………………………………..….…………………………

66

فهرست منابع……………………………………………………………………………………..…………

67

قبلا حساب کاربری ایجاد کرده اید؟
گذرواژه خود را فراموش کرده اید؟
Loading...
enemad-logo